Среда Олькеницкого ― предназначена для дифференциации энтеробактерий по способности сбраживать углеводы в присутствии индикатора и железосульфатного комплекса.

Приготовление:

Размешать 65,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Тщательно перемешать и разлить в пробирки для тестирования. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить среду в наклонном положении для формирования скоса и столбика высотой 2,5 см.

Пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина, дрожжевой и мясной экстракты являются источником азотистых веществ, серы, микроэлементов, витаминов группы В и др. Хлорид натрия поддерживает оптимальное осмотическое давление. Лактоза, сахароза и глюкоза – ферментируемые субстраты. Тиосульфат натрия в сочетании с ионами железа являются индикатором на сероводород, феноловый красный – индикатор рН.

Микроорганизм, ферментирующий глюкозу, способствует образованию многих кислот, изменяющих цвет среды с красного на желтый. Большее количество кислот освобождается в столбике (при ферментации), по сравнению со скошенной частью (окисление). Бактерии образуют также щелочные продукты (в ходе окислительного декарбоксилирования пептона). Принципиальное значение имеет соотношение глюкоза/лактоза(сахароза) = 1:10. Индикатор феноловый красный становится желтым при значениях рН менее 6,8. При исходном значении рН=7,4 требуется относительно небольшое количество кислот для развития желтого окрашивания среды. Щелочные продукты могут нейтрализовать небольшое количество кислоты, образуемое в скошенной части при ферментации глюкозы. Таким образом, щелочной (красный) скос и кислый (желтый) столбик указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не ферментирует лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие помимо глюкозы лактозу и/или сахарозу, образуют большое количество кислот, которое не может быть нейтрализовано аминами, поэтому скос и столбик будут кислыми (желтыми). Если в ходе ферментации образуется газ, его можно определить по пузырькам и характерным разрывам среды. Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода, который, взаимодействуя с ионами железа, образует нерастворимый черный преципитат сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде и почернение обычно бывает в зоне столбика.

Этот агар рекомендуют использовать в сочетании с Уреазным агаром, чтобы провести дифференциацию сальмонелл и протеев. В суммарном виде реакции на среде представлены ниже.

Щелочной скос/кислый столбик = ферментируется только глюкоза;

Кислый скос/кислый столбик = кроме глюкозы, ферментируется лактоза и/или сахароза;

Имеются пузырьки и разрывы в среде = образование газа;

Отмечается черный преципитат = образование сероводорода.

Некоторые энтеробактерии и сероводородпродуцирующие сальмонеллы на этой среде могут не давать реакцию на сероводород. Некоторые бактерии положительно реагируют на сероводород на среде Клиглера и отрицательно – на Трехсахарном железосодержащем агаре. Это связано с подавлением ферментативного пути образования сероводорода в ходе утилизации сахарозы.

Внешний вид порошка: Гомогенный сыпучий светло-розовый порошок.

Плотность готовой среды: Образуется среда, соответствующая по плотности 1,2%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды: Готовая среда имеет красный цвет, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется скошенный гель.

Кислотность среды: При 25°С водный раствор (6,5% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.