Основа агара Бэйд-Паркера после внесения специальных добавок рекомендуется для выделения и подсчета коагулазоположительных стафилококков в пищевых продуктах и другом исследуемом материале.

 

 

Baird Parker Agar Base (M043)
Рост Staphylococcus aureus

 

 

Состав**:

Ингредиенты	M043 грамм/литр	M1140 грамм/литр
Гидролизат казеина	10,00	10,00
Мясной экстракт	5,00	5,00
Дрожжевой экстракт	1,00	1,00
Глицин	12,00	12,00
Натрия пируват	10,00	10,00
Лития хлорид	5,00	5,00
Сульфаметазин	–	0,05
Агар-агар	20,00	20,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,0 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 63,0 г порошка 950 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С, асептично добавить 50 мл концентрированной суспензии яичного желтка (FD045) и 3 мл стерильного 3,5%-ного раствора теллурита калия (FD047) или 50 мл желточно-теллуритовой эмульсии (FD046). Тщательно перемешать и разлить в чашки Петри.

ОСТОРОЖНО: хлорид лития ядовит. Избегать контакта с ним и вдыхания паров. В случае попадания хлорида лития на кожу немедленно промыть большим количеством воды.

Принцип и оценка результата:

Среда разработана Baird-Parker (1, 2) как модификация теллурит-глициновой среды Zebovitz и соавт. (3) для выделения Staphylococcus aureus из пищевых продуктов. Пируват натрия, защищая поврежденные микробные клетки, помогает выделению культуры. Хлорид лития и теллурит калия подавляют рост большинства сопутствующих микроорганизмов, кроме Staphylococcus aureus. Глицин и пируват натрия стимулируют рост стафилококков. После добавления желтка среда становится желтой и непрозрачной. За счет бактериальных протеаз вокруг соответствующих колоний на средах с желтком формируются прозрачные зоны. Диагностическим признаком коагулазоположительных стафилококков на этой среде является прозрачная зона вокруг серо-черных колоний. По мере дальнейшего инкубирования вокруг колоний формируется непрозрачная зона, что может быть связано с липолитической активностью микроорганизмов. По сравнению с другими средами, агар Бэйд-Паркера при той же селективности меньше подавляет рост Staphylococcus aureus (4, 5, 6). В связи с этим данная среда официально признана и рекомендуется компетентными организациями, в частности, для выделения и подсчета стафилококков (7, 8). Вместе с тем, окончательная идентификация Staphylococcus aureus, выделенных на этой среде, должна проводиться с учетом дополнительного теста на плазмакоагулазу. Показано (9), что добавление в среду 50 мг/мл сульфаметазина подавляет рост и роение протеев. Основу агара Бэйд-Паркера (М043) можно также использовать для определения коагулазной активности, если вместо суспензии желтка в среду добавить смесь плазмы и фибриногена. Для этого 375 мл бычьего фибриногена, 2,5 мл кроличьей плазмы, 2,5 мг ингибитора трипсина и 2,5 мг теллурита калия растворяют в 10 мл стерильной дистиллированной воды и добавляют к 90 мл стерильной расплавленной среды, выдержанной при 45-50°С (10). Тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Коагулазоположительные стафилококки на этой среде через 24-40 ч при 35°С образуют белые или серо-черные колонии, окруженные зоной помутнения. Ввиду отсутствия эмульсии желтка необходимо восстановление теллурита, что ведет к образованию стафилококками белых или серых колоний. Для количественной оценки выбирают чашки, где выросло 20-200 колоний. Подсчитывают колонии, похожие на колонии Staphylococcus aureus, и проверяют их на коагулазную активность. Колонии некоторых сопутствующих микроорганизмов могут способствовать уничтожению («разъеданию») коагулазного венчика. В случае отрицательного результата проводят дополнительные подтверждающие тесты. Результат выражают количеством Staphylococcus aureus в 1 г пищевого продукта.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 2,0%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Первоначально среда имеет светло-янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, а после добавления желточно-теллуритовой эмульсии (FD046) становится желтой и непрозрачной, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (6,3% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35°С.

Штамм микроорганизмов (АТСС)	Рост	Цвет колоний	Лецитиназа
Proteus mirabilis (25933)*	Хороший или обильный	Коричнево-черные	—
Staphylococcus aureus (25923)	Хороший или обильный	Серо-черные блестящие	+
Staphylococcus epidermidis (12228)	Слабый или хороший	Черные	—
Micrococcus luteus (10240)	Слабый или хороший	Очень мелкие коричнево-черные	—
Bacillus subtilis (6633)	Слабый или отсутствует	Темно-коричневые матовые	—
Escherichia coli (25922)	Слабый или отсутствует	Большие коричнево-черные	—

Примечание: * на среде М1140 протеи обычно не растут или дают слабый рост без роения